Centrifuge – Preparasi Plasma Darah

Introduksi

Plasma darah merupakan komponen cair dari darah yang banyaknya sekitar 60% dari total volume darah. Sebagian besar merupakan air (sekitar 90% volume) dan berisi protein, glukosa, faktor pembeku darah, ion mineral, hormone, dan karbondioksida. Plasma darah menjadi media utama dalam proses transportasi produk ekskretoris. Plasma darah merupakan cairan supernatant yang diperoleh ketika anti-pembekuan darah disentrifugasi. Darah tercampur dengan sejumlah antikoagulan seperti heparin, oksalat atau ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). Persiapan ini harus dicampurkan dengan segera dan menyeluruh agar terhindar dari pembekuan.

Preparasi Plasma Darah

1.      Peralatan dan Bahan

• Sampel darah manusia
• Tabung Vacutainer mengandung antikoagulan (misal: tabung plastik BD Vacutainer EDTA, 10 mL (#366643))
• Pipet serologis steril dengan volume yang telah disesuaikan dengan sampel
• Tabung centrifuge
• Cryovials
• Centrifuge bench top tanpa pendingin

2.      Prosedur

• Ambil darah dan tempatkan ke dalam tabung vacutainer yang mengandung K2EDTA ~1,8 mg per mL darah. Pastikan tandai volume dengan benar untuk memastikan rasio antikoagulan yang benar.
• Balik tabung vacutainer secarah hati-hati hingga 10 kali untuk mencampur darah dengan antikoagulan dan simpan pada suhu kamar hingga nanti siap disentrifugasi.
• Sampel seharusnya sesegera mungkin disentrifugasi minimal 10 menit pada 1000-2000 RCF (umumnya 1300 RCF) dengan suhu ruang. Jangan memperlambat laju atau menghentikan sentrifugasi yang telah disetel.
• Hasil sentrifugasi akan menghasilkan tiga lapisan, dari atas ke bawah; plasma darah, leukosit, dan eritrosit.
• Perlakukan supernatant (plasma darah) dengan hati-hati pada suhu ruang. Jaga agar lapisan tidak ada yang tercampur lagi.
• Periksa kekeruhan plasma darah. Sampel plasma darah harus disentrifugasi lagi dan dipisahkan lagi dengan material terlarutnya yang masih tersisa.
• Bagi plasma darah ke dalam Cryovial dan simpan pada suhu 80 °C dengan informasi yang jelas, termasuk rincian aditif yang ada dalam darah. 

Sumber: www.proimmune.com

Download PDF